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揭秘胚胎的“冷冻”“解冻”及“破壳”,目前胚胎冷冻基本都是采用玻璃化冷冻法。玻璃化冷冻是指在快速冷冻过程中冷冻保护剂由液态直接冻结为无结构的、极其黏稠的玻璃状态或无冰晶结构的固态,这种玻璃状态能保持其溶液状态的分子和离子分布,从而保持胚胎细微结构的完整性。且在冷冻过程中有一定的冷冻保护剂对胚胎进行保护,后期胚胎将一直在-196℃的液氮中冻存。在这种情况下,细胞几乎是停止一切代谢活动,因此,胚胎基本是没有损伤的。除了胚胎外,目前还有精子和卵子的冷冻,但是相对而言,**后的受精能力要比新鲜卵子稍差。精子、卵子和胚胎的解冻也是在解冻保护液中进行的,有着解冻保护剂的保护作用,精子、卵子和胚胎在解冻过程中的损伤会降到最低。在卵子和胚胎的外层会包裹一层由糖蛋白结构组成的透明带,该结构在胚胎体外培养过程中会逐渐变脆,失去弹性,会影响胚胎的孵出和进一步的着床。因此,需通过化学、机械或激光的方法对胚胎透明带进行切薄、打孔,甚至完整切除,以帮助胚胎从透明带内孵出,这就是辅助孵化技术。目前激光法是最为常用的胚胎孵化方式,可以改善女性年龄≥38岁、基础FSH水平增高、卵子透明带厚度超过17μm、胚胎出现50%以上的碎片、反复移植失败以及冷冻胚胎复苏后移植者的胚胎移植成功率。
我们比较了接受不同刺激治疗方案动物的卵巢基因表达情况,其中包括对照动物组和发生接受刺激大鼠组。在给药后48:小时时,测量了VP值,并提取了来自卵巢的,并用基因的微阵列过滤器分析基因表达情况。基因表达结果显示与温和刺激组和对照组相比,发生的动物中共有基因被下调。上调基因被分为五组:胆固醇合成类、信号传导类、前列腺素合成类、氧化应激过程类以及细胞周期调控类。酪氨酸羟化酶基因的下调(负责多巴胺合成的酶)也被认为是一个特征。综合考虑以上描述的结果,我们认为靶向作用于上调基因可能会影响基本的细胞或生理过程,例如影响泌以及排卵作用,或者会阻断多个分子共同使用的非特异性二次信号传导通路。所以我们着眼于下调基因,这些基因可能与上调基因的作用相反,从而可以成为血管生成过程的天然抑制剂,之后我们可以根据需要提高或上调这些基因。
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