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另外,所报道的实验方法之间有很多的差异,这些差异不仅包括pH值,还包括了细胞裂解液的组成、电泳的条件,以及采用新的染色质染料。一旦彗星形成,可以采用不同的软件程序进行不同方法的测量。最后,结果报告的形式也不同:一些实验室计算精子形成彗星的百分比,另外的实验室报道一定数量精子DNA迁移的平均水平。因此,该方法依然在逐步改进,且缺少标准化,导致不同实验室之间的结果很难比较。精子核基质分析有两种检测方法可以归为细胞核基质分析。精子核基质稳定性分析与精子染色质扩散试验建立在脱掉染色质蛋白未受损伤的DNA能够环绕在精子核骨架这一基础之上。已经发表的文献显示核基质蛋白种系之间的突变能够导致DNA修复和染色质浓集缺陷,因此基质的病变能够损害生育力,应当作为将来考虑的内容之一。


如果女方大于35岁,特别是能够获得大于条运动精子,推荐采用4~6个周期的"低复杂性的"**人工授精联合控制性超排卵技术治疗。初步资料显示为了增加成本效率,缩短治疗时间,有下列情形的不建议采治疗,包括:回收后精子总数低,半透明带结合指数<31%,钙离子诱导的顶体反应≤22%,透明带诱导的顶体反应<16%,和(或)精子DNA碎片指数大于12%。在所有上述情况下,可作为治疗的选择方案。标准或常规的IVF应该限定用于形态评分处于临界且能够获得适当运动精子的患者。此外,最近有报道采用睾丸精子的ICSI治疗可作为治疗精液中精子DNA严重损伤患者的一线选择。在这种情况下,就需要更多的研究来验证评价DNA损伤检测方法的准确性,以及异常对临床结局的影响。


色霉素是另外的一种玻片染色技术,可用于检测精子染色质浓集异常。CMA3是与富含GC序列特异性结合的荧光染料,被认为同鱼精蛋白竞争性结合DNA,因而染色的程度与成熟精子中鱼精蛋白的水平相关。总的来说,最常用的评价精子染色质结构的技术为SCSA、AO和TB实验,后两者容易开展,但与前者相比,劳动量大且在观察者间和观察者内部存在变异。精子DNA碎片的直接评估方法这类检测方法中最常用的为原位缺口平移分析末端转脱氧核苷酰酶介导的dUTP缺口标记分析( TUNEL)和单细胞凝胶电泳分析(COMET ),其基本原理。缺口平是使用荧光显微镜检测的一种相对简单的技术,反应体系中加入一定量的生物素标记的单链DNA片段,在DNA聚合酶I的催化下与模板链结合。TUNEL分析采用末端转脱氧核苷酰酶催化的反应,可定量检测双链DNA断裂情况。TUNEL结果可以使用明视场显微镜、荧光显微镜和流式细胞仪分析。一些报告已经显示人精子DNA断裂碎片的增加可对辅助生殖技术的成功率造成负面影响。这些检测方法均为特异性检测。


习惯上来讲,腹腔镜是不孕检查中的最后一道检查程序。实际上,随着IVF成功率的提高,医生们日益认为即使不进行腹腔镜而进行ART也是恰当的。同时,由于可选择IVF,很难说服HSG正常的患者进行侵人性的检查,如腹腔镜。由于有更高的妊娠机会,这些患者通常会更愿意选择IVF。实际上,我们认为应该在进行IVF前考虑腹腔镜,因为腹腔镜手术可以在诊断的同时对盆腔的病理状态进行处理而且这种干预可以提高IVF的妊娠率。与不孕相关的最常见的盆腔病理是粘连、子宫内膜异位症及输卵管积水。实际上,患有多囊卵巢综合征或卵巢功能减退的妇女也应值得额外关注。现实情况是,求治中夫妇的急于求成和经济方面的顾虑是最重要的,会影响到他们对诊断工具和治疗方法的选择。当HSG结果正常而忽略腹腔镜在对不孕检查中的重要性将会在不提高妊娠率的情况下而增加不孕治疗的成本。

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