亲子鉴定毛细管电泳的进样电压设为15kV是否过高？

在法庭的聚光灯尚未亮起之前，在法官的法槌尚未落下之前，一场无声的较量已在PCR仪的嗡鸣声中展开。样本的采集袋贴着防撕标签，离心机的转子计数到小数点后四位，试剂批号与校准日期被逐条录入LIMS系统——这些看似琐碎的动作，其实都在为最后那一纸鉴定书筑起“不可推翻”的铜墙铁壁。当遗传标记的峰图最终排列成无可争议的阶梯，静默便拥有了比呐喊更大的力量。

一、亲子鉴定核心技术原理

现代亲子鉴定主要基于DNA分型技术，其核心在于比对分析个体间特定遗传标记（STR位点）的匹配程度。

人类遗传基础：

除同卵**外，每个人的DNA序列都具有独特性。子女的遗传物质一半源自生物学父亲，一半来自生物学母亲。

STR位点解析：

即短串联重复序列，指DNA上特定区域存在的重复碱基序列（如"AGAT"重复多次）。不同个体在同一STR位点上的重复次数往往存在差异。

分型检测技术：

通过聚合酶链式反应（PCR）对样本DNA中的特定STR位点片段进行扩增，再运用毛细管电泳等技术精确测定各STR位点的片段长度（即重复次数），从而构建个体的DNA遗传图谱。

亲缘关系判定标准：

将被检测儿童（C）的DNA图谱与假定父亲（AF）和/或假定母亲（AM）的图谱进行比对分析。在每个检测的STR位点上，孩子必须继承一个来自生父的等位基因和一个来自生母的等位基因。通过统计学方法计算亲权指数（PI）和累积亲权指数（CPI），最终得出亲权概率（RCP）。通常要求RCP≥99.99%才能确认亲子关系。

二、标准化技术操作流程

（一）样本采集（关键第一步）

1、人员准备：

确认所有参与者的身份（司法鉴定需核对证件原件）。

签署知情同意书（司法鉴定需按手印）。

采集人员需佩戴干净手套，必要时佩戴口罩、帽子。

2、常用样本类型与采集方法：

口腔拭子（最常用、无创、推荐首选）：

请被采样人清水漱口（半小时内勿进食饮水）。

取出无菌医用棉签，紧握棉签杆，将棉签头在口腔内壁（脸颊内侧）用力旋转刮擦至少20-30次，确保充分接触粘膜细胞。同法采集另一侧。

将棉签垂直放置在清洁的采样卡或干净白纸上，自然晾干（避免阳光直射、热源烘烤，切勿用嘴吹）。

完全干燥后（通常需30-60分钟），放入干净的纸质信封袋，标记清晰信息（姓名、采样日期、关系如“子”、“父”等）。切勿使用塑料袋密封，以防霉变。

关键点：避免棉签接触其他物品；确保充分刮擦获得足够细胞；彻底干燥是防止霉变降解的关键。

静脉血（司法鉴定常用）：

由专业医护人员操作。

常规消毒穿刺部位，抽取适量静脉血（通常2-5mlEDTA抗凝血）。

轻轻颠倒混匀抗凝管数次。

标记清楚，按机构要求保存（通常4℃冷藏）和运输。

血痕样本：

消毒指尖（或耳垂），用一次性采血针轻刺。

取3-5滴血液（每滴约黄豆大小）滴在专用采血卡（如FTA卡）或干净滤纸上。

自然晾干（避免重叠、污染、暴晒、烘烤）。

完全干燥后放入纸质信封袋，标记清楚。

特殊样本（如毛发、烟头、口香糖、精斑等）：

此类样本DNA含量少或易降解，需特殊处理，务必提前咨询鉴定机构确认是否可检及具体要求。

例如毛发：需带有肉眼可见的毛囊（根部白色小囊），至少5-8根。手捏毛干部分取下，勿触碰毛囊。晾干后放入纸袋。

3、样本标记与封装：

每个样本独立包装，在包装袋外清晰、牢固地标记唯一编号、姓名（或代号）、样本类型、采样日期、关系。

所有样本连同填写完整的委托书、身份证明复印件（司法鉴定需要）等一同放入大信封或样本盒。司法鉴定样本需当场封存，当事人及采样人签字/按手印确认。

生物安全：所有样本均视为潜在生物危害物，封装需防泄漏，运输需符合相关生物安全规定。

（二）样本保存与运输

口腔拭子/血痕卡：常温、干燥、避光保存。尽快送检（通常建议采样后一周内送达实验室）。避免高温、高湿、化学污染。

静脉血：需冷藏（2-8℃）保存和运输（冰袋或冷链）。严禁冷冻，否则会溶血破坏细胞。尽快送检（通常建议24-48小时内）。

特殊样本：按机构具体要求保存（如冷冻、干燥等），尽快送检。

运输：选择可靠的快递公司，确保包装牢固、防压、防漏、符合生物安全要求。告知快递内含生物样本。

（三）实验室检测

样本抵达具备资质的实验室后，将经历严格流程：

1、样本接收与登记：核对样本信息、数量、状态（是否污染、霉变、渗漏等），登记入库，分配唯一实验编号。状态异常会联系委托方。

2、DNA提取：在专门的样本制备区进行。

口腔拭子/血痕卡：剪下含样本部分，使用裂解液（含蛋白酶K）消化细胞膜、核膜，释放DNA。

静脉血：离心分离白细胞，裂解释放DNA。

特殊样本：采用针对性方法（如毛囊刮取、精斑浸泡等）提取。

通过离心柱吸附法或磁珠法等纯化DNA，去除杂质（蛋白质、色素、抑制剂等）。

3、DNA定量与质检：使用紫外分光光度计或荧光定量仪测量DNA浓度和纯度（如A260/A280比值），确保提取的DNA质量和数量满足后续PCR扩增要求。

4、PCR扩增：在PCR准备区配置反应体系。

将提取的DNA、引物（特异性识别STR位点两端）、TaqDNA聚合酶、dNTPs（合成原料）、缓冲液等混合。

在PCR仪中进行热循环：变性（高温解链DNA）→退火（引物结合到模板）→延伸（合成新链）。经过约30个循环，目标STR片段被指数级扩增。

5、STR分型检测：在扩增产物分析区进行。

毛细管电泳（主流方法）：将PCR产物与内标（SizeStandard）和去离子甲酰胺混合，上样到毛细管电泳仪。在高电压下，不同长度的DNA片段在毛细管内的聚合物中迁移速度不同。通过激光激发荧光标记（引物上带有不同颜色的荧光染料），检测器记录每个片段的出峰时间和荧光颜色。

数据采集与分析：专业软件将电泳信号转换为数字化的基因图谱，精确读出每个STR位点的等位基因大小（重复次数）。生成包含所有检测位点分型结果的表格。

6、质量控制（贯穿全程）：

阴性对照：不含DNA模板的PCR反应，监测试剂污染。

阳性对照：已知分型的标准品，监测试剂和仪器性能。

内标：确保片段大小判读准确。

实验分区：严格物理隔离（样本制备区、PCR前区、PCR后区、检测区），单向气流，防止扩增产物污染。

人员资质与操作规范：实验人员需经专业培训，严格遵循SOP操作。

（四）数据分析与亲权关系计算

1、数据审核：由技术员和审核员共同复核基因图谱质量及分型结果准确性。

2、三联体分析：

通过比对孩子的STR位点，在排除母亲基因贡献后确定生父基因来源。若假定父亲(AF)未检出必需等位基因，则判定为"排除"。PI值按X/Y公式计算，其中X表示AF提供生父基因的概率，Y表示随机人群携带该基因的概率。

3、二联体分析：

直接分析孩子等位基因是否源自AF。计算PI值时需考虑基因可能来自母亲的情况。

4、CPI计算：将各STR位点的PI值相乘得到CPI值，当CPI≥10000（相当于RCP≥99.99%）时支持亲子关系认定。

5、RCP计算：RCP=CPI/(CPI+1)×100%，反映亲子关系的统计学概率。

6、判定标准：

支持亲子关系：所有检测位点符合遗传规律且CPI≥10000

排除亲子关系：3个或以上位点不符合遗传规律

无法结论：特殊情况需补充检测

（五）报告出具

1、报告内容：

包含机构信息、委托方资料、被鉴定人信息、鉴定方法、试剂盒信息、分型结果、分析说明、鉴定意见、人员签名及机构盖章等内容。

2、报告签发：由授权签字人审核后签发。

三、注意事项

1、资质要求：司法鉴定需选择具有法医物证鉴定资质的正规机构。

2、样本要求：确保样本真实可靠，司法鉴定须现场采样。

3、质量控制：严格防控污染风险，确保样本质量达标。

4、特殊情况：

基因突变可能导致个别位点异常

近亲关系可能干扰结果判断

STR技术无法鉴别同卵**

5、报告解读：

CPI/RCP为概率性结论

建议咨询专业机构解读结果

亲子鉴定是严谨的科学检测过程，需选择正规机构确保结果准确可靠。